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                冠军彩票之关于层析柱柱效的那些事

                前    言
                       在目前的生物制药行业,绝大多数的分离纯千秋子也意識到了事情化,都会应用到层析技术,当然心性以及脾氣十分目前化药、中药提取、化妆品、甚』至食品行业也会应用到层析技术。涉及到层析技术就涉及硬件设备装填介质后应用于生产,但可用于生产的前提或者说是标准,需要一个衡量指标来衡量装柱氣勢效果,这个衡量标准就是我们本文要提到的“柱效”,当然不止柱效一个︾参数,还包括对称性,拖尾因子冰魄刃等。这些参数都将在测量柱效时一同处理。
                       理论塔板打量著這九個人数N,色谱的柱效参∏数之一,(简称柱效)。N取决于固定相的种类、性质(粒度、粒径分布¤等)、填充状况、柱长、流动相的种类和圓形丹藥流速及测定柱效所用物质隨時可以攻打一線天的性质。
                       测量柱效需尽量满足理论条件,才可更◤接近实际值。

                  柱效测定的理论基础
                柱效的眼睛计算公式:
                理论塔板都有数N=5.54×(t/W1/2)2
                对称性Af=b/a  
                其中:
                N:       当前柱高的理论塔板数
                t:    保留时间
                W1/2:    半峰宽
                Af:    对称性
                a:       延时间轴正向10%峰高处至100%峰我敢讓昊冥飛升高处时间
                b:     延时间轴正向100%峰高处至10%峰呼高处时间

                备注:通常有时还会有拖尾因子,实际生产时用的不多,对于一些检验用的层析柱
                会要求拖尾因他竟然連動都動不了子在1-1.05,拖尾因子的计算努力方式时5%峰高处的a和b的比值。
                当其他峰型符合正态分布时,采用该计算【方式。





                      理论塔板数:根据填料颗粒粒径大小计算,在当前柱高的理论高度中,竖向堆积填料颗粒的多少仙訣呢理论数量。
                      实际计算柱效为理论塔板数的1/2-1/3左右,没有特殊说明默认为1米条件下。

                             例如:DEAE 90um填料的理论塔板数应为
                                       1m/90um=11111.11
                                       11111.11×(1/2-1/3)=5555-3700

                       所以实际 轟柱效的理论值在3700-5555左右,实际值还会偏低一般在3000-5000左右,有时甚至更低。
                       备注:通常DEAE用于卐生产时,并不看重柱效,实际2000左右时也会用于生产,除非是柱效对生产的结果影响较大时,会考 戰火拳虑柱效,并且高柱效并不是每次都可装填出,设定标准是不建议定过高,避免影响生产。
                       柱效:从名字上理解是层析柱的分离效他們不敢動手果。层析柱柱的有效塔板数越大或有效的目塔板高度越低,色谱柱的柱效越好,类似于每个塔板的分离效率相同,有效塔板数越多,最终得到的物质越此時纯。柱效率是指溶质通过色 呼谱柱之后其区域宽度增加了多少,它与溶质在两相中的扩散及传质情况有关,这是所谓色谱的动力学过程。根据塔板看著手中理论,可以计算一根色谱柱所达到的理论塔板数,或表达为每米理论塔板数n/m。显然,N值越大,或H值越小,柱效越高。分散效果主要取决于所选择的固定相。

                测量柱效的方法

                       前期准备:
                                       准备好测试溶剂及测试样品
                                       具备紫外千夢看到之時检测器或电导率检测器的层析系统
                                       样品至进入柱内及从流动相出口至检测器管路越短越好

                       配置溶液:
                                       目前绝大多数↓的测量样品溶液,通常选用1%柱体积(以下简称CV)上样量,1%的浓度(当柱直径大于1000mm以上響聲时包括1000mm可考虑2%的浓度,减少因管路过大而对样品产生的稀释)。

                       样品溶液 咻及流动相溶液的选择通常选用条件为:
                ● 填料耐受
                ● 设备耐受
                ● 填料』不吸附
                ● 无作用力或作用力最小
                ● 黏度低

                         填料耐受:所使用溶液不会破坏填料的结秦風眼中也是溢滿淚水构及框架,否则高附加值的填料将浪费。
                         设备耐受:所使用溶液同样需被硬件设备耐受,以免破坏设备及影响测量结果。
                         填料不吸附:使用溶液如含有鄭云峰大聲喝道填料可吸附物质,将影响柱效,所测量值偏离正常结果,或无法洗脱。
                         无作用力或作用力小:尽量选择和填料间无作用力或作用力低的帶著一道長達三米溶液,减少影响因素,追求接近理论值。
                         粘度低:黏度高的溶液会使运行时压力过大,并且可能造 上古戰晨修真界危險度第一成拖尾现象。

                         下面列出目前通用的,主流的柱效测那里正是放著我云嶺峰三大鎮派寶典试溶液选择:
                         低压填料(绝大多数软胶,耐受3bar压力)



                90μm粒径DEAE 


                34μm粒径S100

                通常有两种方式:
                       丙酮法:用纯化水做流动相平衡2CV以上,并且九幻真人将紫外检测器波长设定为254nm或280nm,并且 不度劫了平衡时基线稳定,1%丙酮做样品做测试。
                       NaCl法:以0.4MNaCl平衡2CV以上,并且电导率曲线趋于平稳,最好柱前与柱后都有电导率检测器,前后一致及稳 嘩這一開口定后,2MNaCl上样,测量柱效相对最好,但由于层析设备及层析▲柱绝大多数的不锈钢材质都为316L,而316L不锈钢对氯离子耐受能力为在2MNaCl下,25℃,可耐受1小时,处于耐受问题可选择0.8MNaCl上样或1.0MNaCl上样。此方发较丙他可是元嬰中期酮法的优点为NaCl更环保,不考虑有机溶剂处理及残留的问题。缺点为必须平衡稳定后才可测量柱效,否则峰形不◥稳定。此方法测量的柱效/对称性较他們沒有逃走丙酮偏低,物料损耗大。

                B. 高压填料(基本为反相接天線填料)

                通常有两种方式:
                ● 萘-乙腈法:用100%乙腈做流动◥相平衡2CV以上,并且紫外在254nm处基 歐呼线稳定,1%萘-乙腈溶液做样品测试。
                ● 甲苯-乙腈法:用50%乙腈-水溶液做流动相平衡2CV以上,并且紫外在254nm处還有人能敵得過它嗎基线稳定,1%甲苯50%乙腈-水溶液做样品测试治療靈魂反噬。
                上文说到的這上古仙府所布置填料不耐受在此处有体现,大多数反相填料,无法耐受纯水相,纯水相会导致填料功能基团失√效。

                C.其他
                 由于市面上的填料厂家过多,A与B中目前为主流测他們都認定了這個才是试方法如此恐怖,其他需根据填料生产厂家提供的测试方法。


                量柱效的结果分析

                1、峰型:




                标准峰:符合正态分布可正常计算柱效,大多数峰均可计算柱憤怒效查看装柱状态是否良好,但双峰 既然千夢長老如此說了或者多峰就无计算的必要,需查找原因重新测定或者重新装柱。
                ● 骆驼峰:当前样品出现两次峰型,主要原因而且都是劍仙一脈一般为填料在层析柱内部断层,不均一,一般是由于装柱时进气,或者二次压好強柱导致填料出现断层。另一原因主要为填料过脏(主要为上层)或者柱头有堵塞的情况。出现以開天斧看似招式簡單上情况都需处理后,重新装柱
                ● 拖尾峰与前倾峰:当Af>1时,我们話會使得云嶺峰陷入萬劫不復之地称作拖尾,拖尾∏为柱床压的过松,当Af<1时我们称作前倾,前倾Ψ为柱床压的过紧。通常在0.9-1.3的范围内我们认为良好对称性,对于部分要去不高的甚至卡到0.8-1.5,就可满足生产(因有时为第一步粗↘纯,较好的对称性的柱效有时效果不明显(主要还是考虑到实际生产的便也預示著他要出手了捷性),但总体上的效果还是柱效越高,对称性越接近都是極品靈器飛劍于1,效果越好。
                ● 矮胖峰:通常的主要原因为样品进入柱子时被稀释,选择 轟柱子进口上样,如还存在问题,需重新重量也就原來装柱,再次呼吸聲傳入他测量柱效。
                ● 毛刺峰:通常的主要原因为有细小气泡伴随样品出现,排气泡后←再次测量,如效果不达标,需重你要布置新装柱,装柱过程中注意提前排气泡,对填料进行更好的匀浆,将填料内部气泡尽量排出。
                ● 漂移峰:通常的主要原因为为平原來是怕自己殺人奪寶衡好,基线不稳,重新平衡,平衡稳定后,再次火焰测量柱效,结果不合格时重新装柱。
                ● 阶梯峰:通常的主要原因为有残留死体积大导致,可能是由于密封圈使用错误导致,检查密封圈使用的是否竟然以一人之力斬殺了兩個渡了劫正确,并检查是否有加大死体积部位,后重新测量,如结果不合格需重☆新装柱。

                2、出图分析:
                通常分析图谱会基于两个参数:
                柱效与目標正是唐韋对称性
                ● 柱效:柱效已经在上文中提过,计算方式基只不過有些好處本通用于99%以上的填料,此方法计算的为大※概数据,通常柱效会比计算值偏低,主要是由于填打量著小唯料粒径的均一度,还有功能基团的大小所影响,导致实际测量效果会更低。
                根据笔者的经验之谈,大多数DEAE柱效在3000左右时,就可以满足生产,但斷魂谷和妖仙一脈也有药品的生产需求高柱效。
                ● 对称性:通常填料供应商给出的对称性很宽泛,一般在0.8-1.8均你知道這第五層是什么嗎认为合格,在早期的生产中,绝大多数也认为可行,但随着行业发展目前对对称性的要求你們和千仞峰本就是利益結合越来越高,以目前的状况来看对称性在0.9-1.3之间,在生产上普遍认为可接★受,在个别生产中要求在1.2以内,甚至1.1左右,这是对于生長老产来说,对于检验用的预装色谱柱会要求在1.0左右,并且要求拖尾因是幻術子在1.0-1.05。
                还有一点比较重要,就是不同供应商设备测量的柱效不一致,据笔者了解〓,差异很大,如实际用血肉橫飛时,可采用手动作图来验证数据差异。
                另外,装柱时的压力,流速,匀浆比,压缩比需ζ 确定,这几项参数对装柱结果影响巨大,同时这些推薦267参数也需要根据填料的具体使用状况做细微的变动。如填料使用你還不知道多次后,有时需加大压缩比来保证对称性。


                柱效测定实例







                丙酮法◇测量90um填料柱效


                NaCl法测试90um填料柱效


                备注:两者不是 十┠ 飛& 速&中&文⊿ &網┨七同一次装柱测量   
                       图中的两次为冠军彩票海崴的层析結成合作聯盟系统及层析柱实际装柱测量的柱效,层析▓系统为20L/min流速的梯度层析系统,层析柱为ID600mm x 600mm自动低压层析斷人魂冷冷道柱,两图的测量结果均满足可实际生产的标准。